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中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03- w |* N3 X/ J: i) k. ]
An Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, X......: K) ~: s1 M4 M4 y3 L0 D- c, |) b" h
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# p) o( E* I% b$ V# S$ l; k: u' `! p9 e3 j0 j# M* T/ o1 B
, m# [4 }0 x. e Z* v4 D) @8 @# U$ ?: @
中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03) [- n7 a' V* T9 Q6 j; Q3 H6 }
An Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, Xuzhou 221008, China)
" C4 T( V! x3 ^4 x! Z Abstract: Two strains of high-effective, lubricating oil degrading bacteria, ZL1 and ZL2, were screened out from oil-contaminated soil, which were preliminarily identified as flavobacteriun and tnicrococcus. The effects of temperature, oil content and pH value on their oil-degrading capacities were dletermined by orthogonal experiment of growth conditions. A degrading capacity experiment was carried out with an initial wastewater oil content of 270 mg/L. The experimental results showed that the oil removal rates by the strains ZL1 and ZL2 from the in-oculum in about 2 days were up to 67. 9% and 76. 2% respectively and the adaptation range of strain ZL2 to oil content and pH value was wider than that of ZL1. Key Words: lubricating oil; oil-containing wastewater; wastewater treatment; microorganism; flavobacteri-un; micrococcus
7 n) @' X( M+ q. n 近年来，国内外对石油及兵产品的微生物降解研究常见报道，却鲜见机油废水微生物降解方面的研究。本试验目的是通过常规微生物驯化方法，以市售机油为唯一碳源，从油污土壤中分离筛选出机油高效降解菌株，并对其生长条件及降解特性进行研究，以期进一步应用于含油污水的治理。
! f' T" D r; b0 F/ O+ R# X- Q% O1 材料与方法
+ e) {7 B' k* D; ]6 P* G" v1．1 土壤样品 某石油库贮油罐附近的石油污染土壤，取样3份，按含油量由多至少编为1＃，2＃，3＃。1．2 培养基 本试验选取两种无机基础培养基，（用蒸馏水配制并高压蒸气灭菌），编号分别为1＃，2＃，组成如下： 1＃基础培养基：p（KH2PO4）＝0.5g／L，ρ（K2HPO4）＝0.5g／L，P（MgSO4·7H2O）=0.2g／L，ρ（NaCl）=0.2g／L，p（CaCl2）＝0.1g／L，ρ（NH4NO3）＝1.0g／L，MnSO4痕量，FeCl3痕量。 2＃基础培养基：p（NaNO3）=2.0g／L，ρ（KH2O4）＝0．2g／L，ρ（MgSO4.7H2O）＝0.2g／L，ρ（酵母浸膏）＝1.0g／L． 含油培养基是向上述无机基础培养基中加入适量机油。固体培养基中加入质量分数为0．2％的琼脂。1．3 优势菌筛分试验1．3．1 选择富集培养 称取土样各10g，加入到500mL1＃含油培养基（含机油4mL）中，调pH值7.0，通气恒温30℃培养48h后，分别移取上述培养液5mL于45mL1＃，2＃含油培养基（含机油2mL）中，恒温30℃振荡培养。1.3.2 平板分离 制作1＃，2＃固体含油培养基平板苦干，用接种环蘸取振荡培养较好的菌液在相应平板划线，恒温30℃培养48h后平板划线分离，重复数次。选择生长状况良好的菌株进行平板扩大培养。1．4 生长条件正交试验 在保证供氧和氮、磷营养前提下，选择温度。油的质量浓度（以mg／L计）和pH值作为本次实验的三个因素进行三水平实验，方案见表1、表2。将平板培养48h的菌体刮下，5000r／min离心5min，分离得到湿菌体。向方案中每个样品加入0.5g湿菌体，培养60h后测定样品中油的质量浓度。 9 A: W) ^& X0 {. g
表1 ZL1菌株正交试验方案及试验结果
( Z& Y: V" x8 y- Q* C# @& V
0 e3 ]. N; n* a/ R, d4 L( H C
; ^8 c* A u8 f8 A# ~8 P- j! M. R7 h# Q' C( U
$ d( t) R" F; f* p) k! d分组号
- P* k7 r2 X U7 \7 Y因素
, o5 [# z) e# B8 N9 c5 B测定结果ρ（油）/（mg.L-1)
5 c5 b, n# s/ k" B降解测量ρ（油）/（mg.L-1)
9 {/ z0 A6 w3 N: t
! O; w Y$ _9 h# R温度/# J+ E9 ]5 J& k5 z
ρ（油）/（mg.L-1)
8 L8 w* J4 w7 qpH值
% T; Q# |7 c' N! b3 }) I7 k& F6 u* d. }! F. d. k
1( ]" C7 P/ N, \ _" [2 A$ T
25
/ J9 z' B3 O. N/ D" y+ t424
+ i3 Y. T, S* Q5.07 u3 u- m3 |; l+ t" M% q$ e
192
$ U" l$ K5 A1 T, t$ i232
, s# @+ K: |5 G" O" u
6 Z4 F ], U+ P h7 n2! Q. e. E/ M3 m7 X2 z' r3 ]$ v
25. |* W _! H$ u* \$ s4 H# ]
680- I( h! r1 @. z2 A- i4 e
7.0) U- I6 n0 a2 z* m/ k7 Y
416
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+ z( ^( I7 l3 Y6 P+ E3' ]" N6 P- t' ^& }5 F
25
; W( I7 V& O7 F' f5 E+ m9 B: \! l0 ^824, F4 x; V; D: g) j# F
9.05 m! s$ e8 ~# w5 U$ i- ]/ C, V1 J; s
6301 O7 r0 k) Y; w4 ?4 o" T' a
194
( L& e3 \/ y6 r. w6 f! m$ \) }
& ^; ~7 l5 w0 O1 o- [( G/ V4
1 q+ w1 r6 N8 z% K30+ c% a8 Q; y: ^2 [7 N6 r
424
. Y6 w* E# \2 H( @) _7.0: Q& F. M% C2 c
220
; x( n+ M6 ^7 Z# k9 x: f204
8 a/ g4 A; b8 \8 L- J) i
2 a9 y) h6 X. \. m5
- @! L/ j% P: v6 H+ T30
, x1 E$ f) W6 I1 C w2 D680
* R& L; \! h7 w1 d3 Q0 X9.08 I' R& d- ~; Q" A; R. a6 X
507
7 P- j) b9 K2 z' i173' E0 s; C" S' r, C' n9 w4 u/ y
, h& Z, ]" L i8 j0 p
6
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654! l& u& l* U8 k- M. E- S3 `
170
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7
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297
3 J: d1 F" @/ n, n. ~' T127
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* m& l. v. `; k# j9 w569( Q1 q9 Q4 D& L' P M6 |. e
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353 }9 ~9 B" e' s& M" y$ K
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5476 J/ p A9 I. a, x1 V
548
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1 X$ S0 B3 i9 GK3
7 f/ v! ?( F! e) p8 C307
0 u' m( h4 e- x, J433
/ o! A' Q; K* I494
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4 h6 G+ R. J: K% A
. k6 j: i, c% u9 D* DK1
# [) s1 B) k$ S& x8 e! _' L0 P2309 i- X4 N, z J
188
! D, c& n+ Y* J0 Q7 M171
" i/ z5 ], S' U( K4 \% ]: ]
) K" p3 Q' X4 c" Z 9 A; [4 o4 U2 P2 u
2 U+ I& S# @$ v4 iK2
# Z9 R/ [& p8 P0 ^* k8 @182" q$ d2 F; P" W: `
183
6 g4 O& f$ [0 g3 w' G179
, A3 ~3 a/ e/ e- y! P# ? H' K% p8 p, m( g
/ f/ p/ v2 G$ _! Q6 I4 @* b2 G8 l( t7 ~
K3
3 S Z9 p/ N! w& w102* F1 ]; l" T$ W) d
144
: q3 Z) D% d+ G% M! g. q165
. @) u3 `7 S1 ~" S7 j% h, U
! L" j/ w4 i$ R! W# J1 z7 L* C- R |5 a! H2 X$ `: ?
- R% F& e( Y! x, m) W! d- ]/ N) G3 R
R( I1 U2 w, ?8 i' k8 w
128
# B" G# R; t+ A7 P4 j8 r44
& L' L' T: |; ?4 @14
9 t: n- B* r2 A s8 [1 o' l" C9 P
u7 x# i8 n: i* t* T$ m7 E0 ]& \) A
$ v" l+ T! Y+ x% H表2 ZL2菌株正交试验方案及试验结果
+ D7 r' ^5 T! I! Y: }
2 \2 F n# Y& U$ v
- e0 I' L7 B1 ~4 u9 ~
+ S2 `5 R6 D3 S. p- ~/ s, O5 o4 | D
分组号
9 X& {8 e/ N, A: ^9 v5 E1 Z8 p因素$ C& H. I+ }$ b, q
测定结果ρ（油）/（mg.L-1)$ ?. h3 Q/ U, q# k
降解测量ρ（油）/（mg.L-1)
3 ]4 \# r- c' k7 o
. G4 k& i6 p1 }1 N! ]温度/
7 h5 R8 ]0 Q4 ]( Aρ（油）/（mg.L-1)5 l! ]1 B: X5 x, f5 d" G' J2 I
pH值
$ q9 \( m/ y2 Y& e- s
" I' T ?1 C2 V( b! a1
; a& S. [; k- t+ T2 W5 ]25
0 `$ H( F1 G8 B" B' o368+ Z0 S8 ?; G6 P. Z' m7 x7 D
4.0
2 l; F1 z, \& f: w69
# {% T% u2 a i2992 I1 W3 c. f' Q7 D9 c
& C ~4 g& ~. S. m; K2 K0 ~2
) o1 Z* I- H/ a! b9 s! O25
) H0 C9 N! N, N6 X5746 Q5 P" u* ^7 w3 }
6.00 h: y x( ]3 Y# I- [
267# R- K7 w7 T6 u$ k
307
5 l9 q% B2 ^: `6 X8 `1 v1 T" ]/ J6 @/ ]
3- V- m+ [; z; w6 C; g0 ^
253 h: d& N8 u8 G, F" w) [3 X
7673 m# l2 n- P4 W' I) m, w
8.0
- {/ V( ^- Q; I* k! W. q479, _( J5 \- K5 ]% d) M6 n( m$ ]) p
288
4 A5 W3 X3 }8 T
: _* [# O; L4 a2 N1 m% F7 {% c4
# Q8 A, |' Z8 G6 q7 A30
6 \- G, B" [" l& S# Y368
7 v& p) x# L, ]( d$ _" b4 X6.0
* d3 W1 c9 G, I! I/ z( H. ]" W" j- Z, H354+ q- `( L. W$ x4 H8 @8 T/ |; x
314
( P8 ?4 P% V+ J: r
8 x* V" R( Z% [6 [" s! d! X5
8 e9 ]0 X8 i7 }' y& x300 F) m5 W6 Z' g4 b4 I
574
& } X2 N/ I/ n8.0
p2 ?8 J. V+ C0 o" J296/ |& e: c7 l3 a
278
' j( Y" ^4 \6 v1 a0 O8 P; B4 v/ ^* L, c1 V9 p* ]2 @9 ~
6* M, G1 s7 n# l8 b
300 Z5 t3 ~" K$ w# [8 x3 ?
767; l9 o9 \3 \* O) d8 @
4.02 c. p4 e% K+ W. q* _
462' F' U0 y; [5 E; X7 L2 ^4 S
305
c$ y* y0 A/ Y0 K0 o" `& G
* U7 w+ @( b7 }# O: l w- k7
" o K9 A" n. K( K35
' I: f) w7 Q' ~4 c3 |* c# M. Z368
5 w" i' A4 f. l6 _" T8.03 p% @( N$ t5 X
142
- }9 c. y9 Y" p226
- o9 D% y& W( Z2 P
' f9 q9 M: B( l* T9 g$ H8$ s: p! B0 }, B( ~4 y) e) o
35# v0 K9 Z2 t4 F6 y
574+ I; a9 [6 F, P+ c1 l6 B
4.00 R2 e% w; k3 U' W
342
1 y1 N7 Z* S9 E+ i$ H; K6 i232; ^0 v( I4 g& q3 Q( e0 T
& k5 R2 o; T9 A) ?9
1 p( ^: @0 O! G+ N35
2 n3 r! J5 }8 L5 k7 F; a7 h767
8 m! ~ ^7 d& W6.0
# j% S5 C9 l: j1 P548: a9 H! A, ~6 M
219
% ^0 W. u+ D! \0 n5 X+ r" q, u" |& ]# K" S; Y h) r
K17 b1 q1 o1 i8 O% D; A
824$ H3 l& e$ H$ x6 Y4 g0 t7 Q
769
* U' @9 c6 w" F+ `; {766
' O- C. z0 l; E9 r2 \/ C
) t. @! t8 {# @% | J ?" ?; s3 P
% x7 r4 C4 @* W$ R4 \, ~2 P9 }# ]+ H2 x' }
K2
Y/ a ~# h# s$ u# p9 q4 h3 T897
; o& r) O7 L$ y ^4 U3 L1 m+ d817
7 W5 X$ V8 M) k C5 M5 B( P7 y4 O840- V0 ?) T* c% N+ @+ p+ u
$ ~# O1 h$ M, A/ w1 |6 z 1 R. R+ q% |5 J) t2 y
3 M6 H/ H# Y; B0 kK3
; N2 V& C% b8 x: d0 q677
7 O* l' V/ R5 b$ e8126 x4 ?9 }& l) }+ }
7922 E& Y4 ~( k! ?1 P. ~
$ J; O) M0 M( c2 @: q7 s& S
9 e( r6 N: D! t3 M1 j; k3 A
' ]3 [! z& W5 ]K12 s8 C K7 H) g9 w' b; u
275; v0 d8 v. y- J: ~! h' b$ ?
256
6 Q- [; a4 f9 _255
6 d# v; z( Y6 O# @3 N; S, T
( W7 m* w, l6 Z7 O' W' Y% F" Z ) A& E6 c+ L& z8 Z8 r
: q" m' E+ A' K- ^1 w5 c
K2 A2 z( X y" t% M" X
299
3 K e( ^! d3 n1 v( N. ]272, }: r% Y' R/ S, k9 P/ m% K
280
- ]6 i/ i, [' W1 v ' I8 r" v+ o- x4 H n
0 b p" F- Y' n4 j, N% h
1 O. I" Q5 A C' V
K3/ ~' T& P/ R# i7 a6 I
2260 m7 b7 j" E, c+ a9 `0 d+ W
271
1 F6 p; |3 y8 \264
* Y' Z5 \! t. Q q3 O 6 v6 `& U4 ^( @( s
. Y1 p2 Q( R! m6 ]" q' O! b& z
$ ~$ A- Q8 _* mR2 |+ O4 x) N' ?8 G3 B) k& H9 o$ b5 C
737 U. l8 m0 A- i6 ]* \
16$ g3 U2 d, M$ l* n) ^
25
3 V8 r# W) R# P
& e; {+ {0 @2 P 0 u) H4 }8 J3 w j" D4 F/ Y) [- Z4 {
1.5 降解能力试验 配制机油质量浓度为270mg／L的含油培养基1L，投入小型间歇反应器中，加入离心分离得到的湿菌体5g，通气恒温30℃培养，间隔12h取样测定其含油量。1．6 测试方法 用紫外介光光度法测定。
7 v/ ]" G- x6 l, I2 结果分析
8 i' p6 A4 Y2 N" o- G9 ^5 M2．1 优势菌筛分试验 富集培养过程中，1＃土样的培养液出现的泡沫较多，乳化现象明显，菌液也较为粘稠，分离出较多的菌株，说明土壤中的石油烃能刺激石油降解菌的生长。经过选择富集培养、平板分离出4株以机油为唯一碳源的菌株，编号为ZL1，ZL2，ZL3，ZL4，性状见表3。进一步培养后筛选出降解性能较好的ZL1（1＃培养基）和ZL2（2＃培养基）进行正交试验和连续培养试验。
2 {9 }& x9 u5 b, B3 U表3 4株机油降解菌形态特征
, q% ^& R- L) a* a) t) [6 c W( I+ A1 L# L9 o- p9 q t2 F, `# G
% J0 ^! j) ]4 B# y
7 r- K# J1 e# x0 ~( K
- D, m6 ~! h( j+ K: ^1 K( `, A7 P; ^形态特征
/ R: `* `' c+ {+ N8 l+ ^ZL1- y9 x: k# W/ R7 B6 @! v
ZL2
* a9 N3 R! P- k8 z% w8 |ZL3 |' r% j# Y2 @. N- C
ZL4
" X1 P8 ~6 _' r7 K/ \
1 i6 Q, \! A! L% s, o4 h菌落颜色# l7 \7 s# v9 ?/ R6 k
粉红 d" E4 u, A0 \. ~, g+ `
淡黄
0 F7 w- U* K+ Q0 m* ~淡黄3 y, F4 g- O' j# I( l# G% `+ i+ O5 S
粉红
+ u! u* J6 A/ [7 w7 F- s8 z
% X9 L1 F8 Z6 E3 V W V菌落形态
7 P& v/ n: [0 b& z# |+ a不透明，微隆起，全缘，
' ? o" X# I. l* M半透明，圆形! x c# N: {* S4 V* h
半透明，圆形，隆起，
{8 A2 o2 i A不透明，米粒状突起，
% w" c5 {- T$ B2 S5 J: E+ M: A/ j
- k8 |& L* e Q7 Y, p$ Z, s& T
8 j$ V5 \+ U. h光滑，有光泽
; w; g, w6 V+ @. r9 L光滑，较干燥" ?* U2 f4 ?7 G
光滑，有光泽1 W4 n4 y- z$ l% u! ?
较湿润
# F+ |$ f" I* H7 {; q
- w6 T4 [ G. H菌体形态
; F, l. l2 v. t% C% S短杆
1 B& I0 B0 U3 q0 R2 m+ }) U- H球形/ Y+ M+ I! M+ M- b
杆状
( ~# F8 E0 n$ \$ z3 T丝状. t" {4 x4 C9 r: D& y
- H, W6 g0 s* |4 w' e+ @' v菌体大小/μm, d' D" b, d: x; L1 H/ A4 z
（0.3-0.8)×(0.6-1.0）1 @1 @( S5 h! T! h3 Y
Φ0.3/ ?8 g. C6 h5 Q$ p- V
（0.5-0.8)×(1.3-5.0)
- B+ c. |, } y: k' J+ Z: \0.2×(6-60)
/ T6 ^" v8 x1 W8 k; [
1 s- d2 r& f7 o: K, E' D革兰氏染色) N! `4 P. j+ o' a6 e) R, w
G$ N- ~- I% e3 |9 z
G
1 Z$ w% }, u/ |( v8 E+ c* U" JG d- o9 ?; j; t" _$ W, w: g
G0 G+ `8 \) H1 V/ \2 ~) h8 z
* @) e) D0 E5 ^/ y; S/ X1 T8 H) p
初步鉴定
& O# b5 d+ ]" A+ L; c" H: }黄杆菌属
b. Q9 h. y! v0 i微球菌属
9 {8 H* X( s) i假单胞菌属9 k# \0 H) k5 o. X5 c& |
酵母菌属
9 \) E) L) ]. S7 U2 {% I$ `8 v" U% [2．2 生长条件正交试验 ZL1，ZL2菌株按设定的正交试验方案进行试验，测定其剩余含油量，以降解油量作为考察指标，计算结果见表2、表3。分析极差值R可以看出：ZL1菌的R温度为128，ZL2菌的R温度为73，均为最大极差值，说明温度是影响降解效果的主要因素。25℃ZL1菌降解机油能力较强；油质量浓度越低降解效果越好；pH值为7时，降解效果最好，说明ZL1菌适于在中性条件下生长。30℃ZL2菌降解机油能力较强；机油的质量浓度在368-767mg／L范围内对降解效果影响不大，以ρ（油）=574mg／L时降解效果最明显，还应进一步扩大试验的油含量范围以确定油含量对ZL2菌降解能力的影响；pH值在4－8范围内对降解效果的影响也不显著，其中PH值为6时降解效果最好，说明ZL2菌较适于在中性偏酸条件下生长。2.3 降解能力试验 向1L油质量浓度为270mg／L培养液中投加5g湿菌体进行间歇培养，考察ZLI，ZLZ菌的降解能力，结果见图1。由含油量与培养时间关系曲线可以看出：ZL1，ZL2菌被加人含油培养基后很快适应环境，随着培养时间的增长，含油量不断下降。ZL1菌在30h左右去除率达到最大，后含油量下降缓慢，到60h左右曲线趋于平直；ZL2菌在20h左右去除率达最大，48h左右曲线趋于平直。曲线说明ZL1，ZL2菌适应能力较强，ZL1菌在0－60h内生长旺盛对机油的去除率可达67．9％，ZL2菌在0－48h内生长旺盛，对机油的去除率高达76.2％，试验后期降解曲线趋于平直，含油量基本不再变化，可能是由于机油中的一些重组分难于降解的原因。
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$ |! z. I- z5 k3 h3 结论 + ?' Y$ Z$ u- J* s, ]6 u4 B
①石油污染土壤较适于做高效石油降解菌驯化菌源。筛选到两株高效机油降解菌ZL1，ZL2。通过正交试验得出ZL1黄杆菌属适于在25℃，油的质量浓度在424mg／L左右，中性条件下生长。ZL2微球菌属适于在 30℃，油的质量浓度在574mg/L左右，中性偏酸条件下生长。 ②温度对ZL1，ZL2菌的机油降解能力影响较大。ZL2菌的PH值、机油浓度适应范围较广，有较好的应用前景。 ③ZL1，ZL2菌对初始机油质量浓度为270mg／L培养液的去除率分别达到67.9％和76.2％，混合菌株的降解效果有待进一步研究。 4 D& Y2 T% S L+ m- f% F
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+ W: u1 s. f) s8 ^ 作者简介：刘勤亚（1977－），女，河北石家庄人，环境工程专业硕士在读。
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狗仔卡
发表于 2010-2-21 20:12
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